Nel 1988, subito dopo la morte della madre, il piccolo Peter Quill viene rapito da un gruppo di pirati spaziali chiamati "Ravagers", guidati da Yondu Udonta. Ventisei anni dopo, sul disabitato pianeta Morag, Quill ruba una misteriosa sfera, l'Orb. Quill viene ostacolato da Korath, un alleato del malvagio estremista Kree, noto come Ronan l'Accusatore. Quill riesce a seminare Korath e a fuggire da Morag con la sfera, ma Yondu, venuto a sapere del furto ed interessato all'Orb, mette una taglia sulla sua testa, mentre Ronan manda la letale assassina Gamora a recuperare la sfera. Quill si reca su Xandar, capitale dell'impero Nova, dove cerca di vendere la sfera al Broker, ma egli, venuto a sapere dell'interesse di Ronan per l'artefatto, decide di sospendere le trattative. In seguito Gamora tende un'imboscata a Quill e gli ruba l'Orb, quindi Quill si lancia all'inseguimento. Durante la lotta che ne segue, intervengono due cacciatori di taglie: un procione geneticamente modificato, Rocket Raccoon, e Groot, un alieno simile a un albero umanoide. Gamora sconfigge i due ma Quill la mette a terra. I Nova Corps intervengono ed arrestano i quattro, che vengono condotti a Kyln, un carcere spaziale di massima sicurezza. In prigione Gamora viene attaccata da Drax il Distruttore, un carcerato in cerca di vendetta su Ronan, responsabile della morte della sua famiglia. Quill riesce a convincere Drax a risparmiare la vita di Gamora, la quale rivela di aver tradito Ronan, che vuole distruggere Xandar e con esso milioni di innocenti. Dopo aver saputo che Gamora conosce qualcuno interessato alla sfera Quill, Rocket Raccoon, Groot e Gamora stessa si alleano per fuggire dalle Kyln. Altrove Ronan si incontra con il padre adottivo di Gamora e di Nebula, il temibile Thanos, per discutere del tradimento di Gamora. Accompagnati da Drax, Quill e il resto del gruppo riescono a fuggire dalle Kyln a bordo della Milano, l'astronave di Quill, e si recano a Knowhere, una remota stazione spaziale costruita nella testa di un Celestiale morto. Il gruppo si incontra con il contatto di Gamora, un collezionista chiamato Taneleer Tivan. Tivan apre la sfera, rivelando al suo interno una Gemma dell'Infinito, un artefatto di incommensurabile potere che solo in pochi riescono a tenere in mano senza morire. All'improvviso Carina, la tormentata assistente del Collezionista, afferra la gemma, scatenando una potente esplosione che distrugge lei e l'intero edificio. Nel frattempo Drax, ubriaco, invia un messaggio a Ronan. Ronan arriva su Knowhere e sconfigge Drax, mentre il resto del gruppo cerca di sfuggire ai soldati di Ronan, guidati dalla viscida e crudele sorella di Gamora, Nebula. Nebula distrugge la navetta di Gamora, lasciandola morente nello spazio, e Ronan fugge con la sfera. Quill si mette in contatto con Yondu e poi si dirige verso Gamora per cercare di salvarla. Yondu arriva in tempo e salva i due. Rocket Raccoon, Drax e Groot minacciano di attaccare la nave di Yondu per salvare Gamora e Quill, ma quest'ultimo riesce a convincere Yondu ad aiutarlo per recuperare l'Orb. In seguito Quill manda un messaggio a Nova Prime ed a Rhomann Dey, informandoli dell'imminente attacco dell'Accusatore. Sulla Dark Aster, la sua nave ammiraglia, Ronan decide di tenere per sé la sfera, unendola al suo martello da guerra, e si mette in contatto con Thanos, minacciando di ucciderlo subito dopo aver distrutto Xandar. Nebula, piena di rancore nei confronti del padre adottivo, si schiera dalla parte di Ronan. In orbita sopra Xandar giunge la Dark Aster, che viene attaccata dai Ravagers, dai Nova Corps e dal gruppo di Quill, che riesce a penetrare le difese della nave. Ronan usa il potere della Gemma per distruggere la flotta dei Nova Corps. Drax uccide Korath, mentre Gamora sconfigge Nebula, che precipita dalla nave ma riesce a fuggire su un'astronave dei Ravagers. Il gruppo si ritrova in balia del potere di Ronan ma Rocket fa schiantare la Milano contro la Dark Aster, che precipita su Xandar. Mentre la nave precipita Groot si sacrifica per i suoi amici, creando uno scudo intorno a loro. Ronan emerge dalle macerie della nave, pronto a distruggere Xandar; Quill riesce tuttavia a distrarlo con una canzone, permettendo a Rocket e Drax di distruggere il suo martello. Quill riesce a sottrarre la Gemma all'Accusatore e, con l'aiuto di Gamora, Drax e Rocket, riesce a contenerne il potere e ad usarla per disintegrare Ronan. In seguito Yondu chiede a Quill di consegnargli la sfera, ma l'umano lo inganna, dandogli una sfera con una bambola all'interno e consegnando la vera sfera ai Nova Corps, in modo da poterla mettere al sicuro. Mentre i Ravagers se ne vanno Yondu osserva di aver fatto bene, ventisei anni prima, a non consegnare Quill a suo padre, come invece avrebbe dovuto fare. Su Xandar i Nova Corps cancellano tutti i precedenti crimini del gruppo di Quill, ora noti come Guardiani della Galassia. Quill scopre di essere solo per metà umano, dal momento che suo padre è parte di una razza antica e sconosciuta. In seguito Peter decide di scartare l'ultimo regalo di sua madre: una cassetta contenente le sue canzoni preferite. I Guardiani partono a bordo della Milano, ricostruita dagli Xandariani, insieme a un vasetto contenente un piccolo Groot, rinato da un rametto.
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